洛阳谪窒家具有限公司

一、保健食品中脂溶性維生素分析方法概況

　　保健食品中添加有維生素A、維生素D、維生素E、維生素K和b－胡蘿卜素，一般情況下后兩者使用相對(duì)較少 。鑒于脂溶性維生素的特點(diǎn)和樣品基質(zhì)情況，樣品一般需要在皂化后經(jīng)有機(jī)溶劑提取后測(cè)定。

　　1．維生素A

　　一般添加視黃醇醋酸酯和視黃醇棕櫚酸酯兩者之一或兩種均添加。通常情況下成分復(fù)雜的樣品需采用皂化反應(yīng)后測(cè)定其中的視黃醇。成分相對(duì)簡(jiǎn)單的片劑和膠囊樣品可采用溶劑提取直接測(cè)定視黃醇醋酸酯或視黃醇棕櫚酸酯。奶粉等產(chǎn)品可以使用胰酶或蛋白酶處理，溶劑提取后測(cè)定視黃醇醋酸酯或視黃醇棕櫚酸酯。

　　2．維生素E

　　一般情況下添加的是a－維生素E。成分相對(duì)簡(jiǎn)單的樣品可采用溶劑提取直接測(cè)定。多數(shù)樣品需要在皂化反應(yīng)后測(cè)定其中的維生素E。

　　同時(shí)分析維生素E 4種結(jié)構(gòu)并包括內(nèi)標(biāo)物，可使用如下正相柱：

　　（1）Nucleosil-NH2 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二惡烷=85：15，295nm

　　（2）Zorbax SIL 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二惡烷：異丙醇=985：10：5，295nm

　�。�3）Lichrosorb-NH2 4.0×250mm，5μm，正己烷：異丙醇=99：1，295nm

　　（4）YMC－Pac A－600 （NH2），3μm，正己烷：異丙醇=98：2 Ex：290nm Em：325nm

　　3.維生素D

　　一般情況下添加的是維生素D2和維生素D3中之一。目前維生素D的分析尚不如維生素A和維生素E成熟，主要原因?yàn)楹�量低，前處理過(guò)程損失多，與維生素E較難分離�，F(xiàn)在采取的方法是采用乙腈＋甲醇＋水＝25+75+4作為流動(dòng)相，根據(jù)樣品中維生素D的情況，選擇維生素D2和維生素D3互為內(nèi)標(biāo)。維生素D的分析對(duì)于色譜柱的要求較高，一般來(lái)講250mm長(zhǎng)度的Zobax SB-C18 比較適合分析要求。

　　4.b－胡蘿卜素

　　b－胡蘿卜素一般出現(xiàn)在植物性保健食品中，分析方法相對(duì)成熟。目前我們將維生素E、番茄紅素和b－胡蘿卜素通過(guò)采用不同的波長(zhǎng)達(dá)到一次性分析的目的。樣品采用二氯甲烷進(jìn)行提取，分析過(guò)程需要加入抗氧化劑BHT對(duì)組分進(jìn)行保護(hù)。

　　流動(dòng)相為甲醇：乙腈＝50：50

　　色譜柱：Supelcosil RP C18

　　5.α－胡蘿卜素

　　α－胡蘿卜素目前也出現(xiàn)在保健食品中已有應(yīng)用，初步將其與b－胡蘿卜素一同分析。樣品采用丙酮進(jìn)行提取。

　　流動(dòng)相為甲醇：甲基叔丁基醚：水＝310：76：14

　　色譜柱：Symmetry C18

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm

　　二．保健食品中水溶性維生素分析方法概況

　　目前建立并推廣了一套的系統(tǒng)分析方法，通過(guò)選用多波長(zhǎng)離子對(duì)高效液相色譜分析可以解決維生素B1、維生素B6、煙酸、煙酰胺、維生素C的分析。生物素、泛酸、葉酸需采用單獨(dú)的高效液相色譜分析條件。維生素B2采用熒光分光光度法分析。

　　1．維生素B1（鹽酸硫胺、硝酸硫胺）

　　分析維生素B1可采用鹽酸苯海拉明作為內(nèi)標(biāo)。樣品采用甲醇+水+磷酸提取。

　　流動(dòng)相為硫酸月桂酯鈉溶液（5g/530mL）：乙腈：磷酸＝530：470：0.4

　　色譜柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：260nm

　　2.維生素B1（呋喃硫胺）

　　有報(bào)道，呋喃硫胺是維生素B1的活性結(jié)構(gòu)，在韓國(guó)、日本等產(chǎn)品中使用呋喃硫胺與鹽酸硫胺、硝酸硫胺的色譜行為有較大區(qū)別。

　　流動(dòng)相為甲醇：水：乙酸：PigB6＝450：530：20：20

　　色譜柱：m-Bondapak C18

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm

　　3.維生素B6（吡哆醇）、煙酸、煙酰胺

　　分析維生素B6、煙酸、煙酰胺可采用愈創(chuàng)木酚甘油醚作為內(nèi)標(biāo)。樣品采用甲醇+水+磷酸提取。

　　流動(dòng)相為1－癸烷磺酸鈉溶液（1.22g/850mL）：乙腈：磷酸＝850：150：0.4

　　色譜柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18

　　在維生素類保健食品中煙酸應(yīng)用極少，基本上添加的均為煙酰胺。

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm

　　功能性飲料中添加的咖啡因和苯甲酸也可以同時(shí)檢測(cè)。根據(jù)大量實(shí)驗(yàn)認(rèn)為液體類樣品應(yīng)使用TSK Gel-C18，固體樣品兩者皆可。

　　4.維生素C

　　除顏色較深、含量較低、天然植物干制品外，一般樣品中的維生素C均可以采用碘溶液滴定法進(jìn)行測(cè)定。利用高效液相色譜法測(cè)定維生素C可利用維生素B6（吡哆醇）、煙酸、煙酰胺流動(dòng)相體系，因維生素C色譜保留時(shí)間較短，可以將降低其中乙腈的比例至5%。提取溶劑盡可能使用水，以避免在前面出現(xiàn)倒峰影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確。

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm

　　5.維生素B2

　　有關(guān)維生素B2的色譜分析方法有報(bào)道，但在實(shí)際樣品分析過(guò)程中因保留時(shí)間較短且與其它峰難以較好分離，故采用將其轉(zhuǎn)化為光黃素后進(jìn)行熒光分光光度法分析。

　　6.泛酸（維生素B3）

　　泛酸采用液相色譜分析法進(jìn)行檢測(cè)，樣品用水提取即可。

　　流動(dòng)相：0.02M磷酸二氫鉀溶液：乙腈=95：5，pH=3.0

　　色譜柱： m- Bondapak C18 300mm

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：200nm

　　7.生物素

　　生物素的分析正在初步摸索階段，目前采用pH=3.5 0.25M磷酸鹽緩沖溶液：甲醇=77：23的流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)200nm。 目前的需要解決的問(wèn)題是保留時(shí)間較長(zhǎng)，大約在30min左右；此外靈敏度較低。

　　8.葉酸

　　葉酸一般使用弱堿性水溶液提取，為保證提取效果可以在50℃水浴中加熱10min。

　　流動(dòng)相：磷酸二氫鉀緩沖溶液：甲醇=460:40，pH=6.0

　　色譜柱： m- Bondapak C18 300mm

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm

　　葉酸的研究方向：通過(guò)大量實(shí)際樣品檢測(cè)研究，發(fā)現(xiàn)在蟲草等天然產(chǎn)物中存在與葉酸色譜保留時(shí)間完全一致的物質(zhì)；不少樣品中葉酸含量較低，擬采用固相萃取等技術(shù)作為前處理手段。

　　9.維生素B12

　　維生素B12的化學(xué)分析目前還是一個(gè)難題，對(duì)于含量較高，組成簡(jiǎn)單的原料和添加劑進(jìn)行高效液相色笱單的原料和添加劑進(jìn)行高效液相色失雜的多種維生素樣品的分析方法正在摸索之中。

　　維生素B12的研究進(jìn)展：雖然維生素B12有3個(gè)特征波長(zhǎng)，但樣品在不經(jīng)處理的情況下也很難分析；在溶液中鈷胺素很容易出現(xiàn)氰鈷胺素、甲鈷胺素、羥鈷胺素等幾種形式共存的現(xiàn)象。為避免出現(xiàn)上述問(wèn)題，更好地去除樣品中的干擾雜質(zhì)并對(duì)樣品中的維生素B12進(jìn)行富集，目前采用加入表面活性物質(zhì)、鹽析、有機(jī)溶劑萃取等方法去除雜質(zhì)，再通過(guò)固相萃取法進(jìn)行富集的手段。

　　三、類維生素分析方法概況

　　1.肉堿（維生素BT）

　　肉堿若采用分光光度法檢測(cè)比較繁雜，高效液相色譜法測(cè)定相對(duì)簡(jiǎn)單。利用高效液相色譜法測(cè)定肉堿同樣利用維生素B6（吡哆醇）、煙酸、煙酰胺流動(dòng)相體系，因肉堿色譜保留時(shí)間雖比維生素C長(zhǎng)但相對(duì)仍較短，因此流動(dòng)相可以同維生素C一樣。提取溶劑盡可能使用水或pH=5~6的水，以避免在前面出現(xiàn)倒峰影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確。

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm

　　2.輔酶Q10

　　對(duì)于維生素類樣品中輔酶Q10的檢測(cè)采用液相色譜分析法。樣品中輔酶Q10使用正己烷作為提取溶劑。

　　色譜柱：TSK Gel-C18

　　流動(dòng)相：乙腈+四氫呋喃+水=55+40+5

　　檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm

　　3.肌醇

　　對(duì)于維生素類樣品中肌醇的檢測(cè)建立了一套衍生化-氣相色譜分析法。樣品中肌醇經(jīng)過(guò)提取，徹底去除水分后進(jìn)行衍生化，正己烷提取后進(jìn)行氣相色譜分析。

　　衍生化試劑：三甲基氯硅烷：六甲基二硅氨烷：二甲基甲酰胺=1：2：8

　　色譜柱：BP-5彈性石英毛細(xì)管柱, 25m×0.32mm

　　色譜條件：載氣 50mL/min

　　尾吹氣 50 mL/min

　　氫氣 40 mL/min

　　空氣 500 mL/min

　　分流比 1：50

　　四、需要解決的問(wèn)題及展望

　　1．解決樣品前處理技術(shù)

　�。�1）不少油性膠囊樣品中加入了水溶性維生素，如何應(yīng)用前處理手段解決提取、凈化問(wèn)題。

　　（2）對(duì)于含量較低的樣品如何應(yīng)用固相萃取等手段。

　　（3）對(duì)于目前原料微囊化制作技術(shù)如何應(yīng)對(duì)。

　　2．解決色譜多組分分析技術(shù)

　　在目前現(xiàn)有的多組分分析技術(shù)的基礎(chǔ)上，如何能將維生素B1并入維生素B6系列之中或創(chuàng)建新的流動(dòng)相體系，再囊括維生素B2和葉酸等是今后研究的重要方面。

　　3. 解決分析過(guò)程快速化

　　在目前大量樣品檢測(cè)的基礎(chǔ)上應(yīng)歸納總結(jié)出樣品前處理方法指南，確定樣品組成和前處理方法之間的關(guān)系。